發(fā)表者：北京博奧森生物 發(fā)表時間：2016-2-15
眾所周知，要用Western Blot比較不同條件下或者不同組織中，目的蛋白表達(dá)量的相對多少，前提條件是等量的蛋白上樣，才有比較的基礎(chǔ)。特別是在表達(dá)量不高時，上樣量的差別就很可能影響結(jié)果的分析。所以需要內(nèi)參做對比。
內(nèi)參即是內(nèi)部參照（Internal Control），對于哺乳動物細(xì)胞表達(dá)來說一般是指由管家基因編碼表達(dá)的蛋白(Housekeeping Proteins)，它們在各組織和細(xì)胞中的表達(dá)相對恒定，在檢測蛋白的表達(dá)水平變化時常用它來做參照物。在Western Blotting 實驗中，除了需要進行蛋白抽提、蛋白定量、等量蛋白上樣電泳、轉(zhuǎn)膜、靶蛋白抗體孵育、顯色等步驟以外，還需要進行內(nèi)參的檢測，以校正蛋白質(zhì)定量、上樣過程中存在的實驗誤差，以保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。
有我北京博奧森生物技術(shù)公司自主研發(fā)的β-Actin肌動蛋白（抗體）貨號：bs-0061R。
特點優(yōu)勢
1.經(jīng)親和層析純化的濃縮液（或凍干粉），該抗體質(zhì)量超過國外任何公司的同種產(chǎn)品；
2.用于Western Blotting為非常清晰的一條帶稀釋比達(dá)1：400；
3.用于免疫組化表達(dá)位置準(zhǔn)確，特異性強、效價高；
4.分子量：42Kda，根據(jù)需要可提供各種不同的包裝；
5.IgG含量為100μg/0.2ml 500ug/1ml；
6.價格僅為0.1ml/400.00元：0.2ml/650.00元人民幣；
7.只需4℃保存運輸，有效期：-20℃液體長達(dá)兩年（凍干粉狀態(tài)長達(dá)5年以上）；
8.產(chǎn)品費用低 ，性能穩(wěn)定、質(zhì)量可靠、易于保存；
9.該抗體適用廣泛，可用于人、羊、狗、豬、牛、兔、雞和大、小鼠等動物種屬蛋白檢測；
在國外發(fā)表的文章中，Western Blotting 實驗結(jié)果須進行內(nèi)參校正已成為一種慣例。但是，國內(nèi)仍有不少科研人員在Western Blotting實驗中忽略了內(nèi)參的使用，將蛋白濃度測定作為規(guī)范需相互比較的各種樣品間上樣量等同的唯一方法。然而各種蛋白質(zhì)濃度定量方法，都存在局限性，不能完全準(zhǔn)確的確定各種樣品的準(zhǔn)確蛋白濃度。 蛋白質(zhì)定量以后進行電泳時需要等量上樣，此步驟也存在操作誤差。在Western blotting實驗時使用內(nèi)參，即可簡便地對定量和上樣步驟產(chǎn)生的誤差進行校正。此外使用內(nèi)參可以作為空白對照，檢測蛋白轉(zhuǎn)膜情況是否完全、整個Western Blot顯色或者發(fā)光體系是否正常。
實驗結(jié)果分析其實很簡單：如果樣品蛋白量有限，只夠進行一次電泳轉(zhuǎn)膜實驗時，分別檢測樣品的內(nèi)參量和目的蛋白量。將各樣品目的蛋白量分別除以其內(nèi)參含量，得到的數(shù)值即為內(nèi)參校正后的各樣品中目的蛋白相對含量，再用此數(shù)值進行樣品間的比較和分析，得到目的蛋白含量在不同樣品間的實際變化結(jié)果。如果樣品量充分，可以先檢測內(nèi)參，觀測樣品間內(nèi)參顯色條帶是否一致，根據(jù)差異大小調(diào)整各樣品的上樣量重新進行Western Blotting實驗，至內(nèi)參量一致為止；若內(nèi)參一致，即可進行不同樣品間目的蛋白表達(dá)變化分析。這樣雖然麻煩一點，但是可以保證結(jié)果更有說服力，更可信。畢竟我們的實驗是一種嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ鳌?
